Integrin β8/ITGB8 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-435838-ACT

Itgb8 codifica a integrina β8, uma subunidade β que se associa à αv para formar o recetor αvβ8, uma molécula de adesão na superfície celular que liga ligandos da matriz extracelular às redes do citoesqueleto e de sinalização. Em tecidos de rato, a ITGB8 contribui para a migração celular, a remodelação tecidular e a comunicação epitélio–mesênquima, sendo também um regulador-chave da ativação do TGF-β latente através de interações com complexos associados à MEC. Por meio de crosstalk com a sinalização de adesões focais e as vias TGF-β/SMAD, a ITGB8 influencia programas de diferenciação, propriedades de barreira e o comportamento de células imunitárias. A atividade desregulada da ITGB8 tem sido associada a remodelação fibrótica, microambientes inflamatórios e biologia tumoral em estudos pré-clínicos e translacionais, sustentando a sua utilidade como um nó mecanístico para a investigação de vias.

Integrin β8/ITGB8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Itgb8 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin β8/ITGB8 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Itgb8 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Itgb8, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin β8/ITGB8. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Itgb8 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin β8/ITGB8 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin β8/ITGB8 em células tumorais com expressão de Itgb8 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.