Plasmide CRISPR d'Activation (h) Integrin α7/ITGA7: sc-401678-ACT

ITGA7 code l’intégrine α7, une sous-unité α se liant à la laminine qui s’hétérodimérise principalement avec l’intégrine β1 pour former un récepteur majeur de surface cellulaire impliqué dans l’adhérence à la matrice extracellulaire. L’intégrine α7/ITGA7 favorise l’adhérence, la migration et la différenciation des myoblastes, et contribue à la mécanotransduction ainsi qu’à l’organisation du cytosquelette via des voies de signalisation des adhérences focales, notamment les cascades FAK/Src, PI3K–AKT et MAPK. En régulant les interactions cellule–matrice, ITGA7 influence l’intégrité et le remodelage tissulaires, avec une pertinence particulière pour la biologie du muscle squelettique. Une expression ou une fonction altérée de l’intégrine α7/ITGA7 a été associée à des phénotypes neuromusculaires et liés aux dystrophies musculaires, et a également été étudiée dans des contextes d’invasion tumorale et de comportement métastatique, où la dynamique de l’adhérence est perturbée.

Integrin α7/ITGA7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de ITGA7 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Integrin α7/ITGA7 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus ITGA7 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription ITGA7, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Integrin α7/ITGA7. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus ITGA7 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Integrin α7/ITGA7 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Integrin α7/ITGA7 dans les cellules tumorales présentant une expression de ITGA7 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.