Integrin α7/ITGA7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401678-ACT

ITGA7 codifica a integrina α7, uma subunidade α ligante de laminina que heterodimeriza principalmente com a integrina β1 para formar um receptor essencial na superfície celular para a adesão à matriz extracelular. A integrina α7/ITGA7 sustenta a adesão, migração e diferenciação de mioblastos e contribui para a mecanotransdução e a organização do citoesqueleto por meio de vias de sinalização de adesão focal, incluindo FAK/Src, PI3K–AKT e cascatas de MAPK. Ao regular as interações célula–matriz, ITGA7 influencia a integridade e o remodelamento tecidual, com relevância particular para a biologia do músculo esquelético. Alterações na expressão ou na função da integrina α7/ITGA7 têm sido associadas a fenótipos neuromusculares e relacionados a distrofias musculares, e também têm sido investigadas em contextos de invasão tumoral e comportamento metastático, nos quais a dinâmica de adesão está perturbada.

Integrin α7/ITGA7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ITGA7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Integrin α7/ITGA7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ITGA7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ITGA7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Integrin α7/ITGA7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ITGA7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Integrin α7/ITGA7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Integrin α7/ITGA7 em células tumorais com expressão de ITGA7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.