Plasmide Double Nickase (h) Inhibin β-B: sc-402060-NIC

INHBB code la sous-unité bêta B de l’inhibine, qui s’homodimérise pour former l’activine B ou s’hétérodimérise avec d’autres sous-unités de la superfamille TGF-β afin de moduler la signalisation via des programmes transcriptionnels dépendants de SMAD2/3. L’équilibre activine/inhibine influence la rétroaction endocrine, la fonction des tissus reproducteurs et, plus largement, le contrôle de la prolifération cellulaire, de la différenciation, de l’inflammation et du remodelage de la matrice extracellulaire. La signalisation de l’activine induite par INHBB recoupe des voies qui régissent le développement des gonades et la régulation hypophysaire, et la littérature associe une expression altérée à une dérégulation du contrôle de la croissance et du remodelage tissulaire dans des contextes incluant des troubles de la reproduction et des phénotypes liés au cancer. Ces propriétés font d’INHBB une cible utile pour des études mécanistiques des dynamiques de signalisation de la famille TGF-β et des réponses transcriptionnelles spécifiques au contexte.

Inhibin β-B Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus INHBB dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de INHBB. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de INHBB. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de INHBB.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.