IL-6 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421114-ACT

O Il6 de camundongo codifica a interleucina-6 (IL-6), uma citocina pleiotrópica que coordena as respostas imunes inata e adaptativa ao regular a sinalização de fase aguda, o recrutamento de leucócitos e a diferenciação de células B e T. A IL-6 sinaliza por meio de IL-6R e gp130 para ativar as vias JAK/STAT3, MAPK/ERK e PI3K/AKT, remodelando programas transcricionais inflamatórios e o metabolismo celular. A expressão desregulada de IL-6 é amplamente estudada em inflamação crônica, autoimunidade, respostas a infecções e no crosstalk entre tumor e microambiente imune, em que a atividade sustentada de STAT3 pode alterar a polarização mieloide e o remodelamento tecidual. Como um nó central em redes de citocinas, a IL-6 é frequentemente investigada quanto aos seus efeitos na sinalização parácrina, na função de barreira e na expressão gênica responsiva ao estresse.

IL-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il6 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-6 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il6 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il6, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-6. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il6 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-6 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-6 em células tumorais com expressão de Il6 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.