IL-4I1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-420354-ACT

Il4i1 codifica a IL-4I1, uma L-aminoácido oxidase secretada, produzida predominantemente por células mieloides apresentadoras de antígeno, que modula a ativação imune por meio do metabolismo de aminoácidos e da sinalização oxidativa. Ao catalisar aminoácidos como a fenilalanina, a IL-4I1 pode influenciar o equilíbrio redox e moldar respostas de células T, integrando-se a vias que regulam a apresentação de antígenos, a polarização inflamatória e a comunicação entre células imunes em microambientes teciduais. Em modelos murinos, alterações na expressão de Il4i1 têm sido associadas a mudanças na regulação da imunidade adaptativa e podem afetar resultados experimentais em contextos de inflamação crônica e de interações entre tumor e sistema imune. Essas características tornam a IL-4I1 um nó molecular útil para estudar a regulação imunometabólica e mecanismos de imunossupressão impulsionados pelo microambiente.

IL-4I1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Il4i1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-4I1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Il4i1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Il4i1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-4I1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Il4i1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-4I1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-4I1 em células tumorais com expressão de Il4i1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.