IL-3Rα Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-437304-ACT

IL3RA codifica a cadeia alfa do recetor de interleucina-3 (IL-3Rα/CD123), uma subunidade do recetor de citocinas que confere especificidade de ligação ao ligando e se associa à cadeia beta comum para iniciar a sinalização dependente de IL-3. A ativação do IL-3Rα promove, a jusante, a ativação das vias JAK/STAT, PI3K/AKT e MAPK/ERK, sustentando a sobrevivência e proliferação de células hematopoéticas e a diferenciação da linhagem mieloide. A expressão de IL3RA é enriquecida em progenitores hematopoéticos e em determinados subconjuntos imunitários, tornando-o um marcador útil para estudar programas induzidos por citocinas e a dinâmica do tráfego de recetores. A sinalização desregulada de IL3RA e alterações na abundância do recetor têm sido associadas a mielopoiese aberrante e a fenótipos imunitários inflamatórios, o que motiva a investigação mecanística em modelos celulares relevantes para a doença.

IL-3Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL3RA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-3Rα O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL3RA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL3RA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-3Rα. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL3RA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-3Rα no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-3Rα em células tumorais com expressão de IL3RA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.