IL-28R CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402530-ACT

IFNLR1は、インターフェロンλ受容体1（IL-28Rα）をコードしており、IL10RBと協調してIII型インターフェロン受容体複合体を形成し、IFN-λファミリーのサイトカインに対する応答を仲介するリガンド結合サブユニットです。受容体が活性化されるとJAK/STATシグナル伝達が作動し、STAT1/STAT2/IRF9依存的にインターフェロン刺激遺伝子（ISG）の転写を誘導します。これにより、上皮バリアにおける抗ウイルス防御や粘膜免疫が形成されます。IFNLR1の活性は、自然免疫のプログラミング、抗原提示、ならびに上皮が豊富な組織における炎症の基調に影響を与え、受容体発現の違いが抗ウイルス制限能や免疫介在性病態のばらつきと結び付くことが示唆されます。IFN-λ/IFNLRシグナルの破綻は、呼吸器および消化管のウイルス感受性、慢性炎症、腫瘍と免疫の相互作用といった文脈で研究されています。

IL-28R CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性IFNLR1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IL-28R CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における IFNLR1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はIFNLR1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IL-28Rの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のIFNLR1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIL-28R依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびIFNLR1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIL-28R経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。