IL-22 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403228-ACT

A IL22 humana codifica a interleucina-22 (IL-22), uma citocina produzida principalmente por células Th17/Th22 e por células linfoides inatas, que sinaliza por meio do complexo receptor IL-22R1/IL-10R2 em compartimentos epiteliais e estromais. A IL-22 ativa a via de sinalização JAK/STAT, com programas transcricionais marcantes conduzidos por STAT3 que regulam a integridade de barreira, a expressão de peptídeos antimicrobianos, respostas de fase aguda e processos de reparo tecidual. Por meio de crosstalk com vias inflamatórias, incluindo NF-κB e MAPK, a IL-22 modula a imunidade de mucosas no intestino, pulmão e pele. A atividade desregulada de IL-22 tem sido associada a distúrbios inflamatórios e a contextos de remodelamento epitelial, tornando-a um nó útil para estudar respostas epiteliais induzidas por citocinas.

IL-22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL22 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-22 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL22 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL22, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-22. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL22 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-22 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-22 em células tumorais com expressão de IL22 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.