IL-1 beta/IL1B Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400078-ACT

IL1B codifica a interleucina-1 beta (IL-1β), uma citocina pró-inflamatória produzida principalmente por monócitos e macrófagos ativados e processada para a sua forma madura após a clivagem dependente de caspase-1 mediada pelo inflamassoma. A sinalização de IL-1β através de IL1R1 e IL1RAP ativa vias dependentes de MyD88 que convergem para as cascatas de NF-κB e MAPK, conduzindo programas transcricionais envolvidos no recrutamento de leucócitos, febre e respostas de fase aguda. Este eixo molda a ativação imunitária inata, os outputs inflamatórios associados à piroptose e o crosstalk com citocinas como IL-6 e TNF. A expressão desregulada de IL1B e a atividade do inflamassoma estão implicadas em patologias inflamatórias crónicas e autoimunes, inflamação metabólica e inflamação associada a tumores em múltiplos contextos tecidulares.

IL-1 beta/IL1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IL1B sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IL-1 beta/IL1B O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IL1B em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IL1B, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IL-1 beta/IL1B. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IL1B nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IL-1 beta/IL1B no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IL-1 beta/IL1B em células tumorais com expressão de IL1B silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.