IGFBP3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-400682-NIC

A proteína 3 ligadora de fatores de crescimento semelhantes à insulina (IGFBP3) é um importante transportador secretado de IGF-I e IGF-II no plasma humano, que modula a biodisponibilidade dos ligantes e a sinalização via IGF1R, influenciando assim a atividade das vias PI3K–AKT e MAPK. Além de sequestrar IGFs, a IGFBP3 pode participar de processos independentes de IGF, incluindo regulação do ciclo celular, apoptose, senescência e respostas ao estresse, por meio de interações com parceiros na superfície celular e no núcleo. Alterações na expressão da IGFBP3 ou no seu processamento proteolítico têm sido associadas à desregulação do controle de crescimento e a microambientes inflamatórios, tornando-a um alvo frequente em pesquisas em oncologia, metabolismo e remodelamento tecidual. Seus papéis dependentes do contexto sustentam estudos de sinalização endócrina/parácrina, comunicação cruzada com a matriz extracelular e programas transcricionais que governam proliferação e sobrevivência.

IGFBP3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus IGFBP3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de IGFBP3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função IGFBP3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com IGFBP3 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.