Plasmide Double Nickase (h) IGFBP3: sc-400682-NIC

La protéine 3 de liaison aux facteurs de croissance de type insulinique (IGFBP3) est un important transporteur sécrété d’IGF‑I et d’IGF‑II dans le plasma humain, qui module la biodisponibilité des ligands et la signalisation via IGF1R, influençant ainsi l’activité des voies PI3K–AKT et MAPK. Au-delà de la séquestration des IGF, IGFBP3 peut engager des processus indépendants des IGF, notamment la régulation du cycle cellulaire, l’apoptose, la sénescence et les réponses au stress, grâce à des interactions avec des partenaires de surface cellulaire et nucléaires. Une expression altérée d’IGFBP3 ou son traitement protéolytique a été associée à un contrôle de la croissance dérégulé et à des microenvironnements inflammatoires, ce qui en fait une cible fréquente en recherche en oncologie, en métabolisme et en remodelage tissulaire. Ses rôles dépendants du contexte étayent les études sur la signalisation endocrine/paracrine, le dialogue avec la matrice extracellulaire et les programmes transcriptionnels régissant la prolifération et la survie.

IGFBP3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IGFBP3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IGFBP3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IGFBP3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IGFBP3.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.