Particules Lentivirales d'Activation (m) IGFBP2: sc-421063-LAC

Igfbp2 code la protéine de liaison aux facteurs de croissance de type insulinique 2 (IGFBP2), un régulateur sécrété de la biodisponibilité des IGF qui module l’intensité de la signalisation IGF1/IGF2, l’engagement des récepteurs et l’activité en aval des voies PI3K–AKT et MAPK. En tamponnant et en localisant les ligands IGF dans le milieu extracellulaire, IGFBP2 influence la prolifération, la survie et la migration cellulaires, ainsi que les interactions avec la matrice, et peut façonner la croissance tissulaire et l’homéostasie métabolique. Dans des modèles murins, une expression modifiée d’Igfbp2 a été associée à des changements d’adiposité et de sensibilité à l’insuline, ainsi qu’à des effets dépendants du contexte sur l’inflammation et le remodelage tissulaire. Ces propriétés font d’Igfbp2 une cible utile pour étudier la dynamique de la signalisation des facteurs de croissance, la biologie du microenvironnement tumoral et le dialogue endocrinien–paracrine au cours du développement et dans des états pertinents pour la maladie.

Les particules d'activation lentivirales IGFBP2 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Igfbp2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales IGFBP2 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Igfbp2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de IGFBP2. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Igfbp2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.