IFN-α/βRβ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403854-ACT

IFNAR2 codifica a subunidade 2 do receptor de interferon alfa/beta (IFN-α/βRβ), um componente central do complexo receptor de interferon do tipo I que medeia as respostas celulares ao IFN-α e ao IFN-β. A ligação do ligante ativa a sinalização dependente de JAK1/TYK2 e programas transcricionais a jusante mediados por STAT1/STAT2-IRF9 (ISGF3), coordenando a defesa antiviral, a apresentação de antígenos e a regulação da imunidade inata. Vias dependentes de IFNAR2 modulam a comunicação cruzada com a sinalização de NF-κB e MAPK e influenciam redes de citocinas que moldam a ativação de células imunes e a inflamação tecidual. Alterações na expressão de IFNAR2 ou na capacidade de sinalização são frequentemente investigadas em contextos de expressão desregulada de genes estimulados por interferon, patologia imunomediada e interações imunes em tumores.

IFN-α/βRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de IFNAR2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

IFN-α/βRβ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus IFNAR2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição IFNAR2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de IFN-α/βRβ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus IFNAR2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de IFN-α/βRβ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via IFN-α/βRβ em células tumorais com expressão de IFNAR2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.