IFN-α/βRα Double Nickaseプラスミド (h): sc-401662-NIC

IFNAR1は、I型インターフェロン受容体の細胞表面サブユニットであるインターフェロンα/β受容体α鎖（IFN-α/βRα）をコードしており、IFN-αおよびIFN-βに結合して自然免疫シグナル伝達を開始します。リガンド結合によりJAK1/TYK2キナーゼが活性化され、下流でSTAT1/STAT2–IRF9（ISGF3）複合体が形成され、抗ウイルス防御、抗原提示、免疫細胞間クロストークを制御するインターフェロン刺激遺伝子（ISG）の転写が誘導されます。IFNAR1の活性は受容体の内在化やユビキチン介在性分解によるターンオーバーによっても調節され、シグナルの強度と持続時間に影響します。IFNAR1が関与するI型インターフェロン経路の制御異常は、炎症・自己免疫の文脈に加え、腫瘍—免疫相互作用や宿主—病原体応答の表現型においても広く研究されています。

IFN-α/βRα ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における IFNAR1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、IFNAR1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、IFNAR1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、IFNAR1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。