Plasmide Double Nickase (h) Id3: sc-400944-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Id3 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Id3 Double Nickase (h) et le plasmide Id3 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant ID3. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Id3 Antibody (2B11): sc-56712
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Id3 | sc-400944-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Id3 | sc-400944-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ID3 code l’inhibiteur de liaison à l’ADN 3 (Id3), une protéine à hélice-boucle-hélice (HLH) dépourvue de domaine de liaison à l’ADN, qui module la transcription en séquestrant les protéines E et d’autres facteurs bHLH. Par ce mécanisme dominant négatif, Id3 influence les décisions de destinée cellulaire en régulant des programmes liés à la prolifération, à la différenciation et à l’engagement de lignée dans de nombreux tissus, notamment au sein des compartiments immunitaire et vasculaire. L’activité d’ID3 s’articule avec des réseaux de signalisation tels que TGF-β/BMP et des voies dépendantes des MAPK, qui influencent la temporalité du développement et les réponses au stress. Une expression ou une fonction dérégulée d’ID3 a été associée à des états de différenciation altérés et à des processus de remodelage pathogènes décrits en biologie du cancer, en immunologie et en recherche sur les maladies cardiovasculaires.
Id3 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus ID3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de ID3. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de ID3. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de ID3.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.