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ICK慢病毒激活颗粒(h) | sc-406371-LAC | 200 µl | $455.00 | |||
ICK慢病毒激活颗粒(h2) | sc-406371-LAC-2 | 200 µl | $455.00 |
肠道细胞激酶(Intestinal cell kinase,ICK)是一种属于 CMGC 家族的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,能够整合调控细胞周期进程、初级纤毛生物学以及细胞骨架动态的多种信号线索。ICK 定位于纤毛及基底体,在其中调节纤毛内运输(intrafilagellar transport)和纤毛长度,从而与 Hedgehog 依赖性的发育信号及增殖控制相联系。ICK 活性异常与纤毛病相关表型和发育障碍有关;同时,在异常生长与分化的背景下,围绕 ICK 的激酶信号网络失调也已成为研究重点。因此,ICK 是解析由激酶驱动、将纤毛发生与转录程序及细胞状态转换相耦联的通路的一个有用靶点。
ICK 慢病毒激活颗粒(h)通过将完整的协同激活介导体(SAM)转录激活系统包装到可直接转导的高滴度慢病毒颗粒中,满足了这一需求,从而能够在更广泛的人类细胞类型中高效上调 ICK 表达。
ICK 慢病毒激活颗粒(h)通过慢病毒转导递送协同激活介导体(SAM)系统的所有功能组分。该系统包含三种共同转导至靶细胞的颗粒制剂:一种编码与VP64转激活域融合的无催化活性的dCas9(D10A和N863A突变),并携带布拉西定抗性基因; 一种编码MS2-p65-HSF1融合蛋白并携带潮霉素抗性基因的制剂;以及一种编码靶标特异性20 nt sgRNA(与两个MS2 RNA适配体融合)并携带嘌呤霉素抗性基因的制剂。经过慢病毒转导和表达盒的基因组整合后,SAM组分得以稳定表达,并在ICK转录起始位点上游的近端启动子区域内的靶位点组装。在此处,VP64、p65和HSF1协同作用,招募内源性转录 machinery,从而驱动内源性ICK表达的持续上调。使用无核酸酶活性的 dCas9 可避免引入双链 DNA 断裂,并保留原生的 ICK 基因组位点和调控架构。
慢病毒载体具有多项实用优势:稳定的基因组整合支持细胞分裂过程中的可遗传激活;高滴度颗粒制剂免去了内部病毒生产的需要;且与原代细胞、非增殖细胞及转染抗性细胞类型的兼容性,扩大了实验的可及性。可通过嘌呤霉素、潮霉素和布拉西定进行三重抗生素筛选,以确认并富集成功的转导。
仅供研究使用。不用于诊断或治疗。