IAP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401544-ACT

ヒトALPIは腸型アルカリホスファターゼ（IAP）をコードしており、IAPはグリコシルホスファチジルイノシトール（GPI）アンカー型の刷子縁（ブラッシュボーダー）酵素として、リン酸モノエステルを加水分解し、腸管腔内において微生物関連リガンドの脱リン酸化を行います。IAPは、腸管腔内のヌクレオチドプールを調節し、炎症促進性のリン酸化分子を解毒することで、上皮バリアの恒常性、粘膜の自然免疫シグナル伝達、ならびに微生物生態に寄与します。ALPIの活性は腸管の分化や腸上皮細胞の機能に関わるプロセスと関連し、粘膜表面での炎症トーンや栄養取り扱いを規定する経路と交差します。ALPIの発現または活性の制御異常は、腸管の炎症性表現型や、消化管疾患モデルに関連する宿主–マイクロバイオーム相互作用の変化と関連づけられています。

IAP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ALPIの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

IAP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ALPI 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はALPI転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性IAPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のALPI遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるIAP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびALPI発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるIAP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。