HXK II Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-400611-LAC

O gene HK2 humano codifica a hexoquinase II (HXK II), uma enzase associada à mitocôndria que catalisa a fosforilação da glicose dependente de ATP para glicose-6-fosfato, comprometendo a glicose com a glicólise e com vias anabólicas a jusante. Ao conectar a utilização de glicose ao metabolismo mitocondrial, a HXK II sustenta o fluxo glicolítico, a entrada na via das pentoses fosfato e adaptações metabólicas durante a hipóxia por meio da integração com a sinalização de HIF-1 e programas regulados por PI3K–AKT–mTOR. A atividade de HK2 é frequentemente associada à reprogramação metabólica em estados proliferativos, nos quais a glicólise elevada e um manejo redox alterado influenciam a sobrevivência celular e a capacidade biossintética. Como resultado, HK2/HXK II é amplamente utilizada como um nó mecanístico para estudar a detecção de glicose, o acoplamento mitocondrial–metabólico e fenótipos metabólicos relevantes para doenças em células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HXK II (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de HK2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais HXK II (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição HK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de HXK II. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo HK2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.