HXK II Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400611-ACT

O gene humano **HK2** codifica a **hexoquinase II (HXK II)**, uma enzima associada à mitocôndria que catalisa a fosforilação da glicose dependente de ATP em **glicose-6-fosfato**, comprometendo a glicose com a glicólise e vias biossintéticas relacionadas. Ao acoplar o fluxo glicolítico ao metabolismo mitocondrial, a HXK II influencia a homeostase energética celular, o equilíbrio redox e a disponibilidade de precursores anabólicos que alimentam a via das pentoses fosfato e a síntese de nucleotídeos e lipídios. A expressão elevada de HK2 e a glicólise reprogramada são frequentemente observadas em estados proliferativos e adaptados ao estresse, ligando a HXK II à reprogramação metabólica na biologia do câncer, na ativação de células imunes e na sinalização responsiva à hipóxia. Alterações na atividade de HK2 também têm sido implicadas em tecidos responsivos à insulina e em mecanismos de doenças metabólicas, tornando-o um alvo amplamente utilizado para estudar a utilização de glicose e a comunicação cruzada entre mitocôndria e metabolismo.

HXK II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HK2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HXK II O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HK2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HK2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HXK II. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HK2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HXK II no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HXK II em células tumorais com expressão de HK2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.