HXK I CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-401753

概要

ヒトHK1はヘキソキナーゼI（HXK I）をコードしており、ミトコンドリアに関連する酵素として、ATP依存的にグルコースをグルコース-6-リン酸へとリン酸化し、グルコースを解糖系および関連する生合成経路へと導きます。グルコース利用の最初の律速段階を制御することで、HXK Iは細胞のエネルギーバランス、ペントースリン酸経路との連結を介したレドックス恒常性、ならびにグリコーゲンやヌクレオチド合成への代謝フラックスに影響を与えます。HK1の活性は、ミトコンドリア外膜での相互作用を通じてミトコンドリア機能およびアポトーシス関連シグナルと緊密に統合されています。HK1の発現や制御の異常は、がんにおけるグルコース代謝の破綻や、神経発達および溶血性の表現型と関連づけられており、代謝・ミトコンドリア生物学研究における重要性を支持しています。

HXK I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHK1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HK1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HK1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HXK Iタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HXK Iシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HK1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HXK Iの機能に不可欠なHK1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HK1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HXK I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHXK I CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HK1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HXK I HDRプラスミド（h）および HXK I HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHK1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHK1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。