HUNK CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-405786

概要

HUNK（hormonally upregulated Neu-associated kinase）は、AMPK関連キナーゼファミリーに属するセリン／スレオニンタンパク質キナーゼをコードしており、増殖因子およびホルモン応答性シグナル伝達を上皮細胞の挙動と統合する役割を担います。HUNKは、細胞生存プログラムの制御、極性維持、ならびに接着や遊走に影響する小胞／トラフィッキング関連プロセスの調節に関与するとされ、ストレス応答や増殖の文脈においてPI3K–AKT経路およびMAPKネットワークの出力との関連も報告されています。HUNKの発現または活性の破綻（ディスレギュレーション）は複数のがん関連モデルで観察されており、腫瘍細胞の適応、転移性形質、治療応答フェノタイプにおける役割が研究されています。さらに、HUNKの生物学的特性は乳腺および神経組織におけるキナーゼシグナルのクロストークとも関連し、疾患関連の細胞状態で生じる経路のリワイヤリング機構を解明する研究を支えています。

HUNK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHUNK遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HUNK内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HUNKのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HUNKタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HUNKシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HUNK欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HUNKの機能に不可欠なHUNKエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HUNKゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HUNK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHUNK CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HUNK遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HUNK HDRプラスミド（h）および HUNK HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHUNKホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHUNK標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。