HuC CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400172

Übersicht

ELAVL3 (HuC) ist ein in Neuronen stark angereichertes RNA-bindendes Protein aus der Hu/ELAV-Familie, das AU-reiche Elemente erkennt und die Stabilität, das Spleißen, die Lokalisation und die Translation von mRNA in sich entwickelnden und reifen Neuronen reguliert. Durch die Kontrolle posttranskriptioneller Programme, die mit neuronaler Differenzierung, synaptischer Funktion und Neuritenauswuchs verknüpft sind, trägt ELAVL3 zur Ausprägung aktivitätsabhängiger Genexpression und zur neuronalen Homöostase bei. Eine veränderte Regulation von RNA-Netzwerken der ELAV-Familie wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Prozessen in Verbindung gebracht, und ELAVL3 wird häufig als Marker und als mechanistischer Einstiegspunkt zur Untersuchung neuronaler Identität verwendet. Die Kartierung ELAVL3-abhängiger RNA-Regulons unterstützt die Forschung zu RNA-Metabolismuswegen, die Erregbarkeit, synaptische Plastizität und Stressantworten in menschlichen neuronalen Modellen beeinflussen.

Das HuC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ELAVL3-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ELAVL3-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ELAVL3 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HuC-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ELAVL3-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HuC-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ELAVL3-Exone abzielen, die für die HuC-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ELAVL3-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HuC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HuC CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ELAVL3-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HuC HDR-Plasmid (h) und HuC HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ELAVL3-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ELAVL3-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.