HuC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400172

Visão geral

ELAVL3 (HuC) é uma proteína de ligação a RNA enriquecida em neurônios, da família Hu/ELAV, que reconhece elementos ricos em AU e regula a estabilidade, o splicing, a localização e a tradução de mRNAs em neurônios em desenvolvimento e maduros. Ao controlar programas pós-transcricionais ligados à diferenciação neuronal, à função sináptica e ao crescimento de neuritos, a ELAVL3 ajuda a moldar a expressão gênica dependente de atividade e a homeostase neuronal. A regulação alterada de redes de RNA da família ELAV tem sido associada a processos do neurodesenvolvimento e neurodegenerativos, e a ELAVL3 é frequentemente usada como marcador e como ponto de entrada mecanístico para o estudo da identidade neuronal. O mapeamento de regulons de RNA dependentes de ELAVL3 dá suporte a pesquisas sobre vias do metabolismo de RNA que influenciam a excitabilidade, a plasticidade sináptica e respostas ao estresse em modelos neuronais humanos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO HuC (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene ELAVL3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do ELAVL3, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do ELAVL3 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína HuC.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de ELAVL3 para a investigação da sinalização de HuC, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) ELAVL3 críticos para a função HuC
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos ELAVL3 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo HuC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo HuC Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus ELAVL3. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo HuC Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR HuC (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia ELAVL3 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo ELAVL3 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.