HSPA14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-407280

概要

HSPA14（Hsp70様タンパク質1）はHSP70シャペロンファミリーの一員で、新生ポリペプチドを安定化し、正しいフォールディングを促進し、細胞ストレス下での凝集を抑制することで、タンパク質品質管理を支えます。翻訳、リボソーム近傍でのシャペロン作用、熱ショックやその他のプロテオトキシックな障害からの回復を調整するストレス応答経路に結び付いたプロテオスタシスネットワークに関与しています。フォールディング能力とミスフォールドタンパク質の処理のバランスを調節することで、HSPA14は酸化ストレス、ER—細胞質間のプロテオスタシスのクロストーク、適応的ストレスシグナル伝達といった状況における細胞恒常性の形成に寄与します。シャペロン活性の破綻やプロテオスタシスの不均衡は、がん生物学、神経変性、炎症性ストレスモデルで一般的に研究されており、HSPA14はストレス耐性とタンパク質恒常性の機序解明に有用な標的となります。

HSPA14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるHSPA14遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、HSPA14内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、HSPA14のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HSPA14タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HSPA14シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、HSPA14欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HSPA14の機能に不可欠なHSPA14エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、HSPA14ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HSPA14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびHSPA14 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、HSPA14遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HSPA14 HDRプラスミド（h）および HSPA14 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHSPA14ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHSPA14標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。