Plasmide Double Nickase (h) HSP90B1/HSP90 beta: sc-400214-NIC

HSP90AB1 code pour HSP90 bêta cytosolique (HSP90B1/HSP90 bêta), une chaperonne moléculaire ATP-dépendante qui stabilise et assure la maturation d’un large éventail de protéines clientes impliquées dans la transduction des signaux, le contrôle du cycle cellulaire et les réponses au stress. En tant que composant central du réseau de protéostasie, HSP90 bêta coopère avec des co-chaperonnes et le système ubiquitine–protéasome pour réguler le repliement des protéines, le contrôle qualité et la dégradation, influençant des voies telles que MAPK/ERK, PI3K–AKT et les réponses aux dommages de l’ADN. Une perturbation de la fonction d’HSP90 bêta peut remodeler la stabilité du protéome et la gestion du stress protéotoxique, avec un intérêt pour l’étude des dépendances de la signalisation oncogénique, du mauvais repliement protéique associé aux maladies neurodégénératives, ainsi que des phénotypes de stress inflammatoire ou métabolique. Comme de nombreuses kinases et régulateurs transcriptionnels dépendent de l’activité d’HSP90, HSP90AB1 est fréquemment utilisé pour explorer la robustesse des voies de signalisation tamponnées par les chaperonnes et l’adaptation cellulaire en conditions de stress.

HSP90B1/HSP90 beta Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HSP90AB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HSP90AB1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HSP90AB1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HSP90AB1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.