HSP 40 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-402810-NIC

DNAJB1 codifica o coaperão HSP40 humano, que regula o ciclo de ATPase do HSP70 e promove o dobramento, redobramento e a triagem de clientes mal dobrados durante estresse proteotóxico. Por meio da estimulação do HSP70 mediada pelo seu domínio J, o HSP40 sustenta redes citosólicas de proteostase que se interconectam com a resposta a proteínas mal dobradas, a sinalização de choque térmico e o controle de qualidade mediado pelo sistema ubiquitina–proteassoma e pela autofagia. A atividade de DNAJB1 influencia a maturação e a estabilidade de diversas proteínas de sinalização, vinculando a capacidade de chaperonas ao controle do ciclo celular e a programas transcricionais adaptativos ao estresse. A alteração da função de chaperonas ou a expressão desregulada de DNAJB1 tem sido associada a desequilíbrio de proteostase e a fenótipos relevantes para doenças, incluindo neurodegeneração e contextos de estresse oncogênico, tornando-o um nó útil para estudos mecanísticos de homeostase proteica.

HSP 40 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus DNAJB1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de DNAJB1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função DNAJB1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com DNAJB1 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.