Plasmide Double Nickase (h) HSP 40-4: sc-403819-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HSP 40-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HSP 40-4 Double Nickase (h) et le plasmide HSP 40-4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant DNAJA1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HSP 40-4 Antibody (KA2A5.6): sc-59554
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HSP 40-4 | sc-403819-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HSP 40-4 | sc-403819-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
DNAJA1 code le co-chaperon humain de la famille HSP40, HSP 40-4 (également appelé Hdj2), une protéine à domaine J qui stimule l’activité ATPase de HSP70 afin de soutenir le repliement et le repliement correct des protéines, ainsi que leur contrôle qualité. Par ses interactions avec HSP70 et les protéines clientes, DNAJA1 contribue à la protéostasie dans le cytosol et aux interfaces associées aux organites, influençant les réponses au stress, le trafic des protéines et les voies de dégradation telles que le système ubiquitine–protéasome. La dérégulation des réseaux de chaperons impliquant DNAJA1 a été associée à une tolérance cellulaire modifiée au stress protéotoxique, avec une pertinence en biologie du cancer et en neurodégénérescence, où la charge en protéines mal conformées et la signalisation de stress sont importantes. La fonction de DNAJA1 est également étudiée dans le contexte des interactions hôte–pathogène et de la stabilité des voies de signalisation, ce qui reflète son rôle dans le maintien de complexes protéiques fonctionnels.
HSP 40-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus DNAJA1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de DNAJA1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de DNAJA1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de DNAJA1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.