HSP 20 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403164-ACT

HSPB6は小型熱ショックタンパク質であるHSP20をコードしており、ストレスにより誘導される分子シャペロンとして、タンパク質のフォールディング、細胞骨格ダイナミクス、ならびにプロテオスタシス（タンパク質恒常性）を調節します。平滑筋や心血管系の細胞種では、HSP20はcAMP/PKAおよび一酸化窒素（NO）–cGMP経路に関連するシグナル伝達プログラムに関与し、リン酸化依存的にアクチン再編成や収縮張力に影響を与えます。さらにHSP20はアポトーシスや酸化ストレス応答とも連携し、プロテオトキシック（タンパク質毒性）および炎症性の条件下における細胞生存に影響します。HSPB6の発現やシグナル伝達の異常は、血管反応性の変化、心筋細胞のストレス適応、平滑筋機能障害と関連づけられており、心血管および気道の生物学に関する機序解明研究において重要です。

HSP 20 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HSPB6の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HSP 20 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HSPB6 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHSPB6転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HSP 20の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHSPB6遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHSP 20依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHSPB6発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHSP 20経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。