HRI CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420950

概要

Eif2ak1は、ヘム調節性阻害因子（HRI）をコードする。HRIはストレス応答性のeIF2αキナーゼであり、EIF2S1をリン酸化して全体的な翻訳を抑制する一方、ストレス適応に関わる転写産物の選択的翻訳を促進する。マウス細胞では、HRIがヘムの利用可能性、酸化ストレス、プロテオトキシックストレスを統合ストレス応答（ISR）に結び付け、プロテオスタシス、レドックス恒常性、ミトコンドリア恒常性を協調的に制御する。このシグナル伝達軸は、ヘム生合成および鉄代謝を制御する経路とも連携し、細胞ストレス下での炎症およびアポトーシス関連プログラムを調節する。HRI依存的な翻訳制御の破綻は、貧血やヘモグロビン異常症のモデル、神経変性、ならびにタンパク質合成の恒常性が乱れるストレス駆動性の代謝・炎症表現型に関わることが示唆されている。

HRI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるEif2ak1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Eif2ak1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Eif2ak1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、HRIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、HRIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Eif2ak1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• HRIの機能に不可欠なEif2ak1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Eif2ak1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• HRI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHRI CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Eif2ak1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  HRI HDRプラスミド（m）および HRI HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはEif2ak1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のEif2ak1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。