HoxB7 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404331-ACT

ヒトHOXB7は、ホメオボックス型転写因子HoxB7をコードしており、DNA結合性の調節因子として、状況依存的な転写プログラムを介して胚発生のパターニングや細胞運命決定を統合的に制御します。成人組織および実験系において、HOXB7は発生シグナル伝達や増殖因子経路に関連する遺伝子ネットワークを調節することで、上皮分化、増殖、遊走に影響し得ます。これにはMAPK/ERKや受容体型チロシンキナーゼ（RTK）出力との相互作用も含まれます。HOXB7発現の異常は、複数の腫瘍コンテキストにおいて浸潤能の亢進、血管新生シグナルの活性化、細胞周期制御の変化といった腫瘍促進性表現型と関連づけられており、転写リワイヤリング研究における機構的ハブとしての価値を裏づけています。幅広い下流標的をもつ転写因子として、HOXB7は発生の遺伝子制御回路、上皮—間葉系の可塑性、腫瘍微小環境関連シグナルにおける役割の観点から、一般に盛んに研究されています。

HoxB7 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HOXB7の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HoxB7 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HOXB7 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHOXB7転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HoxB7の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHOXB7遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHoxB7依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHOXB7発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHoxB7経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。