HNF-4α Double Nickaseプラスミド (h): sc-400159-NIC

HNF4A は、肝細胞核因子4α（HNF-4α）をコードしており、肝臓、腸、腎臓、膵島における組織特異的な遺伝子発現プログラムを制御する核内受容体型の転写因子です。HNF-4α はホモ二量体としてDNAに結合し、糖・脂質代謝、胆汁酸恒常性、異物および薬物代謝、上皮分化を司るネットワークを調節します。また、他の肝臓・内分泌系の調節因子と連携して代謝恒常性の維持に寄与します。HNF4A 依存的な転写回路の攪乱は、単一遺伝子性糖尿病（MODY1）や、より広範な心血管代謝形質と関連しており、HNF-4α 活性の変化は、肝脂肪化、炎症シグナル、上皮性腫瘍の生物学といった文脈でも研究されてきました。これらの特性により、HNF4A はヒト細胞における代謝および分化経路の転写制御を解明する上で重要な結節点となっています。

HNF-4α ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HNF4A 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HNF4A内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HNF4Aの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HNF4Aが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。