HNF-3β Double Nickaseプラスミド (h): sc-400210-NIC

FOXA2は、フォークヘッドボックス型の転写因子である肝細胞核因子3β（HNF-3β）をコードしており、クロマチンを開いて系譜特異的な転写プログラムを確立するパイオニア因子として機能します。ヒトの発生および成体組織の恒常性維持において、FOXA2は内胚葉のパターニングと分化を制御し、肝臓、膵臓、肺、消化管上皮で重要な役割を担います。その活性はWNT、TGF-β、Notchシグナル伝達を含むネットワークと統合され、代謝関連遺伝子の発現、上皮の同一性、臓器特異的な成熟を協調的に調節します。FOXA2に関連する転写回路の破綻は、分化状態の変化や、代謝疾患およびがん生物学における疾患関連表現型と関連づけられています。

HNF-3β ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における FOXA2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、FOXA2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、FOXA2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、FOXA2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。