Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
HMCES Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-405008
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HMCES Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HMCES, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HMCES Antibody (B-2): sc-514238
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HMCES Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-405008 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
HMCES (specifica delle cellule staminali embrionali, legante la 5-idrossimetilcitosina) codifica una proteina che protegge il DNA e agisce in corrispondenza di forcelle di replicazione bloccate e di siti di danno alle basi. HMCES forma un intermedio di crosslink covalente DNA–proteina che schermando i siti abasici (AP) e lesioni correlate contribuisce a coordinare la riparazione accoppiata alla replicazione e a preservare la stabilità del genoma. Questa attività si interseca con la segnalazione della risposta al danno del DNA, con la protezione delle forcelle replicative e con vie coinvolte nel controllo della mutagenesi durante la fase S. Un’alterata funzione di HMCES è quindi rilevante per lo studio dello stress replicativo, dei fenotipi di instabilità genomica e delle dipendenze di riparazione del DNA associate al cancro.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HMCES (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene HMCES in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del HMCES insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto HMCES a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HMCES.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di HMCES per lo studio della segnalazione di HMCES, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni HMCES critici per la funzione di HMCES
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di HMCES per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HMCES CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HMCES CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus HMCES. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HMCES Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HMCES (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia HMCES per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio HMCES definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.