Plasmide CRISPR/Cas9 KO HIVEP3 (m): sc-421334

Présentation

Hivep3 code pour HIVEP3, un grand facteur de transcription à doigts de zinc qui se lie à des éléments d’ADN de type κB et module des programmes d’expression génique sensibles aux stimuli. HIVEP3 est associé à la régulation de réseaux de signalisation immunitaires et inflammatoires, notamment des sorties transcriptionnelles en aval de NF‑κB et de voies apparentées qui coordonnent la production de cytokines, l’activation des lymphocytes et les réponses au stress cellulaire. Dans les systèmes murins, une activité modifiée de HIVEP3 a été associée à une homéostasie immunitaire perturbée et à des phénotypes inflammatoires, ce qui soutient sa pertinence pour des études mécanistiques de l’auto-immunité et de l’inflammation tissulaire. Parce qu’il combine une liaison à l’ADN spécifique de la séquence avec un contrôle transcriptionnel étendu, Hivep3 est également utilisé comme nœud pour l’étude des circuits de régulation génique et des transitions d’état cellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HIVEP3 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Hivep3 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Hivep3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Hivep3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HIVEP3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Hivep3 pour l'étude de la signalisation de HIVEP3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Hivep3 essentiels à la fonction de HIVEP3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Hivep3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HIVEP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le HIVEP3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Hivep3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HIVEP3 plasmide HDR (m) et le HIVEP3 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Hivep3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Hivep3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.