Histone H2A.X Double Nickaseプラスミド (h): sc-400538-NIC

H2AFXはヒストンH2AのバリアントであるヒストンH2A.Xをコードしており、H2A.XはDNA二本鎖切断部位でSer139が迅速にリン酸化され（γH2AX）、その修飾が生じます。この修飾は、DNA損傷応答因子を呼び寄せて配置・組織化する初期のクロマチン依存的シグナルとして機能し、相同組換えと非相同末端結合（NHEJ）の両経路にまたがってチェックポイントの活性化および修復経路選択を調整します。H2A.X依存的シグナル伝達は、ATM/ATRを介したストレス応答、複製フォークの安定性、クロマチンリモデリングと連動し、これらが総合的にゲノム恒常性の維持に寄与します。H2A.Xシグナルの異常やγH2AX動態の破綻は、遺伝毒性ストレスの分子指標として広く用いられており、ゲノム不安定性、がん生物学、放射線感受性に関する研究とも関連します。

Histone H2A.X ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における H2AFX 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、H2AFX内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、H2AFXの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、H2AFXが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。