Plasmide Double Nickase (h) Histone H2A.X: sc-400538-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Histone H2A.X correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Histone H2A.X Double Nickase (h) et le plasmide Histone H2A.X Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant H2AFX. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Histone H2A.X Antibody (938CT5.1.1): sc-517336
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Histone H2A.X | sc-400538-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Histone H2A.X | sc-400538-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
H2AFX code l’histone H2A.X, une variante de l’histone H2A qui est rapidement phosphorylée sur la sérine 139 (γH2AX) au niveau des cassures double brin de l’ADN. Cette modification sert de signal précoce, dépendant de la chromatine, qui recrute et organise les facteurs de la réponse aux dommages de l’ADN, en coordonnant l’activation des points de contrôle (checkpoints) et le choix des voies de réparation entre la recombinaison homologue et la jonction d’extrémités non homologues (NHEJ). La signalisation dépendante de H2A.X s’articule avec les réponses au stress médiées par ATM/ATR, la stabilité des fourches de réplication et le remodelage de la chromatine, qui contribuent ensemble au maintien de l’intégrité du génome. La dérégulation de la signalisation de H2A.X ou l’altération de la dynamique de γH2AX est largement utilisée comme lecture moléculaire du stress génotoxique et est pertinente pour l’étude de l’instabilité génomique, de la biologie du cancer et de la radiosensibilité.
Histone H2A.X Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus H2AFX dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de H2AFX. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de H2AFX. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de H2AFX.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.