Histone H1⁰ CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403716-ACT

H1F0は、分化に関連するリンカーヒストンのバリアントであるヒストンH1⁰をコードしています。H1⁰はヌクレオソームDNAに結合し、高次クロマチンの凝縮を安定化するとともに、ゲノム全体の転写アクセス性を調節します。ヌクレオソーム間隔やクロマチン凝縮に影響を与えることで、H1⁰は細胞状態の遷移、複製タイミング、DNA損傷応答のエピジェネティックな制御に寄与します。H1F0の発現変化は、複数の腫瘍タイプや発生・分化の文脈で報告されており、クロマチン構造の変化が増殖、系譜決定、細胞ストレス適応の変化と結び付いています。これらの特性により、H1⁰はヒト細胞におけるクロマチンアーキテクチャ、転写プログラム、エピジェネティックなリモデリングを研究するうえで有用な標的となります。

Histone H10 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性H1F0の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Histone H10 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における H1F0 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はH1F0転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Histone H10の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のH1F0遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHistone H10依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびH1F0発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHistone H10経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。