Plasmide CRISPR d'Activation (h) Histone H1⁰: sc-403716-ACT

H1F0 code l’histone H1⁰, une variante d’histone de liaison associée à la différenciation, qui se fixe à l’ADN nucléosomal afin de stabiliser la compaction de la chromatine à des niveaux d’organisation supérieurs et de moduler l’accessibilité transcriptionnelle globale. En influençant l’espacement des nucléosomes et la condensation de la chromatine, H1⁰ contribue à la régulation épigénétique des transitions d’état cellulaire, du calendrier de réplication et des réponses aux dommages de l’ADN. Des altérations de l’expression de H1F0 ont été rapportées dans de nombreux types de tumeurs et contextes du développement, où des changements de l’organisation de la chromatine sont associés à des variations de prolifération, d’engagement de lignée et d’adaptation au stress cellulaire. Ces caractéristiques font de H1⁰ une cible pertinente pour étudier l’architecture de la chromatine, les programmes transcriptionnels et le remodelage épigénétique dans les cellules humaines.

Histone H10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de H1F0 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone H10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus H1F0 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription H1F0, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone H10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus H1F0 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone H10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone H10 dans les cellules tumorales présentant une expression de H1F0 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.