Plasmide CRISPR d'Activation (m) Histone Deacetylase 6 (HDAC6): sc-420820-ACT

Hdac6 code l’histone désacétylase 6 (HDAC6), une désacétylase principalement cytoplasmique qui régule l’homéostasie protéique en retirant des groupements acétyle de substrats clés non histones tels que l’α-tubuline et HSP90. En contrôlant la dynamique des microtubules, la formation d’aggresomes, l’autophagie et la biologie des granules de stress, HDAC6 fait le lien entre le remodelage du cytosquelette, la protéostase et les réponses cellulaires au stress. Les voies dépendantes de HDAC6 influencent le transport intracellulaire, la migration cellulaire, la signalisation de l’immunité innée et les réponses à la charge en protéines mal repliées. Une activité dérégulée de HDAC6 a été associée à la neurodégénérescence, à l’inflammation et à des processus liés au cancer, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique dans des études sur des modèles de maladies.

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Hdac6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Histone Deacetylase 6 (HDAC6) Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Hdac6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Hdac6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Histone Deacetylase 6 (HDAC6). Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Hdac6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Histone Deacetylase 6 (HDAC6) au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Histone Deacetylase 6 (HDAC6) dans les cellules tumorales présentant une expression de Hdac6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.