Histone Deacetylase 1 (HDAC1) Double Nickaseプラスミド (h): sc-400203-NIC

ヒトHDAC1は、ヒストン脱アセチル化酵素1（Histone deacetylase 1）をコードしており、クラスIのリジン脱アセチル化酵素として、ヒストンテールからアセチル基を除去することでクロマチンを凝縮させ、転写プログラムを調節します。HDAC1はSin3、NuRD、CoRESTなどのコリプレッサー複合体の構成要素として機能し、エピジェネティック制御を細胞周期の進行、DNA複製・修復、分化と結び付けています。p53依存的転写、RB/E2Fによる制御、ストレス応答性シグナル伝達などの経路とのクロストークを通じて、HDAC1はゲノム安定性と協調的な遺伝子発現の維持に寄与します。HDAC1活性の破綻やクロマチン状態の変化は、がん原性の転写リプログラミングや異常増殖としばしば関連しており、疾患関連の文脈におけるエピジェネティック制御の機構研究における重要な標的となっています。

Histone Deacetylase 1 (HDAC1) ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HDAC1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HDAC1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HDAC1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HDAC1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。