Histone cluster 1 H3A Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-436164-ACT

Hist1h3a codifica la proteina Histone cluster 1 H3A, un’istone H3 canonica che costituisce il nucleo dei nucleosomi e contribuisce a organizzare l’architettura della cromatina in tutto il genoma del topo. Attraverso modifiche post-traduzionali come metilazione e acetilazione, H3 integra segnali che regolano i programmi trascrizionali, la tempistica della replicazione del DNA e l’accessibilità della cromatina durante la progressione del ciclo cellulare e lo sviluppo. Le dinamiche dell’istone H3 contribuiscono all’ereditarietà epigenetica e coordinano processi chiave, tra cui il riconoscimento e la riparazione dei danni al DNA, l’assemblaggio dei nucleosomi accoppiato alla replicazione e la formazione di eterocromatina. Un dosaggio istonico alterato o stati anomali delle modifiche di H3 sono ampiamente associati a instabilità genomica e a pattern aberranti di espressione genica osservati nella biologia dei tumori e nei disturbi dello sviluppo, rendendo Hist1h3a un nodo utile per la ricerca su cromatina ed epigenetica.

Histone cluster 1 H3A Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Hist1h3a senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Histone cluster 1 H3A Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Hist1h3a nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Hist1h3a, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Histone cluster 1 H3A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Hist1h3a nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Histone cluster 1 H3A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Histone cluster 1 H3A nelle cellule tumorali con espressione di Hist1h3a silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.