HIP1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402515-ACT

A HIP1 humana (proteína 1 que interage com a huntingtina) é um adaptador endocítico que conecta componentes das invaginações revestidas por clatrina à actina e a receptores de carga, sustentando a formação de vesículas e o tráfego intracelular. Por meio de interações com clatrina, AP2 e membranas ricas em fosfoinositídeos, a HIP1 influencia a internalização de receptores e a dinâmica de sinalização a jusante, incluindo vias ligadas ao turnover de receptores de fatores de crescimento. Alterações na expressão de HIP1 ou eventos de fusão foram associadas à desregulação da sinalização e a fenótipos de proliferação celular, tornando-a relevante para estudos de transformação oncogênica e de defeitos no tráfego de membranas. A HIP1 também é usada como marcador em investigações de organização do citoesqueleto e proteostase em contextos nos quais a sinalização dependente de endocitose está perturbada.

HIP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HIP1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

HIP1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HIP1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HIP1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de HIP1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HIP1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de HIP1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via HIP1 em células tumorais com expressão de HIP1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.