HIF PHD2 Plasmídeo duplo de Nickase (m): sc-431081-NIC
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- HIF PHD2O plasmídeo de dupla Nickase (m) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase HIF PHD2 (m) e o Plasmídeo Double Nickase HIF PHD2 (m2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para Egln1. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:HIF PHD2 Anticorpo (H-8): sc-271835
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
HIF PHD2 Plasmídeo duplo de Nickase (m) | sc-431081-NIC | 20 µg | $410.00 |
O gene Egln1 de camundongo codifica a prolil-hidroxilase 2 de HIF (HIF PHD2), uma dioxigenase dependente de 2-oxoglutarato/Fe(II) que hidroxila as subunidades HIF-α em normóxia, promovendo a ubiquitinação mediada por VHL e a degradação pelo proteassoma. Ao definir o limiar de detecção de oxigênio, a HIF PHD2 regula programas transcricionais induzíveis por hipóxia que controlam angiogênese, eritropoiese, metabolismo e sobrevivência celular. A atividade de Egln1 interage com a sinalização de HIF-1/2, com a disponibilidade de metabólitos ligados ao ciclo do TCA e com o estado redox, tornando-a central para respostas adaptativas a mudanças na tensão de oxigênio. A desregulação desse eixo é relevante para distúrbios que envolvem desequilíbrio na sinalização de hipóxia, incluindo remodelamento vascular, fenótipos de eritrocitose, respostas teciduais relacionadas à isquemia e a biologia do microambiente tumoral.
HIF PHD2 O Plasmídeo de Nickase Dupla (m) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus Egln1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de Egln1. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função Egln1. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com Egln1 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.