Hepatic Lipase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403928-ACT

O LIPC codifica a lipase hepática, uma enzima lipolítica associada ao fígado e ao endotélio que hidrolisa triglicerídeos e fosfolipídios em lipoproteínas circulantes, remodelando assim o HDL e as partículas contendo apoB. Por meio de suas ações na superfície dos hepatócitos e no compartimento vascular, a lipase hepática contribui para a captação de lipoproteínas, o transporte reverso de colesterol e a homeostase lipídica de forma mais ampla. Variações na expressão ou na atividade de LIPC têm sido associadas a perfis lipídicos plasmáticos alterados, incluindo mudanças no colesterol HDL e em lipoproteínas ricas em triglicerídeos, conectando essa via a fenótipos cardiometabólicos. Como regulador nodal do metabolismo de lipoproteínas, o LIPC é frequentemente estudado na biologia de hepatócitos, no tráfego de lipídios e em redes transcricionais responsivas a nutrientes.

Hepatic Lipase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LIPC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Hepatic Lipase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LIPC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LIPC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Hepatic Lipase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LIPC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Hepatic Lipase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Hepatic Lipase em células tumorais com expressão de LIPC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.