Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-420800

概要

Hba-a1 はマウスのヘモグロビン α1 サブユニットをコードしており、ヘムに結合して赤血球内で可逆的な酸素運搬を担う成熟型ヘモグロビン四量体の中核構成要素です。その発現は赤芽球形成（erythropoiesis）の過程で β-グロビン遺伝子やヘム生合成酵素群と厳密に協調して制御されており、Hba-a1 はグロビン遺伝子制御、鉄代謝、赤血球成熟と密接に結び付いています。α-グロビン量の破綻はヘモグロビンの組み立てや酸化還元バランスを乱し、無効造血や溶血ストレスといった表現型を促進して、αサラセミアや関連する貧血の病態生物学の特徴をモデル化します。高発現で系統特異的な遺伝子であることから、Hba-a1 は α-グロビン座位における制御アーキテクチャや、赤血球系分化を司る機構を解析するために一般的に用いられます。

Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるHba-a1遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Hba-a1内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Hba-a1のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Hemoglobin α1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Hemoglobin α1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Hba-a1欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Hemoglobin α1の機能に不可欠なHba-a1エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Hba-a1ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびHemoglobin α1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Hba-a1遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Hemoglobin α1 HDRプラスミド（m）および Hemoglobin α1 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはHba-a1ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のHba-a1標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。