HCN4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402293-ACT

HCN4は、過分極活性化環状ヌクレオチド依存性チャネル4（hyperpolarization-activated cyclic nucleotide-gated channel 4）をコードしており、自発的な拡張期脱分極と律動的な電気活動に寄与する「ファニー」電流（If）を主に担う因子である。このチャネルは、過分極によって活性化されるNa⁺/K⁺の混合内向き電流を伝導し、cAMPによって直接調節されることで、自律神経シグナルを膜興奮性へと結び付けている。HCN4は、ペースメーカー制御、膜再分極ダイナミクス、ならびに活動電位発火を形作るcAMP依存性シグナル伝達経路の交点で機能する。HCN4の発現量や機能の変化は、心臓の伝導表現型やリズム制御と関連していることが報告されており、ヒト細胞モデルにおける電気生理学および興奮性の機序研究において重要な標的となる。

HCN4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HCN4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HCN4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HCN4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHCN4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HCN4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHCN4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHCN4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHCN4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHCN4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。