Hck Double Nickaseプラスミド (h): sc-401507-NIC

HCKは、造血系および骨髄系の系統で豊富に発現するSrcファミリーの非受容体型チロシンキナーゼであるHckをコードしており、免疫受容体やサイトカインからの刺激をリン酸化依存的なシグナル伝達へと結び付けます。Hckは、自然免疫の活性化、Fc受容体シグナル、インテグリン介在性の接着、貪食、細胞骨格リモデリングを制御する経路に関与し、細胞移動や炎症応答に影響を与えます。PI3K/AKT、MAPK、NF-κB関連ネットワークとのクロストークを通じて、Hckは免疫細胞における増殖・生存・分化の調節にも寄与します。HCKの活性や発現の破綻は異常な骨髄系シグナル伝達と関連付けられており、白血病の生物学や、炎症性微小環境における腫瘍関連マクロファージの機能などの文脈で研究されています。

Hck ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における HCK 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、HCK内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、HCKの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、HCKが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。