Hbb-b2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420803

Übersicht

Mouse Hbb-b2 kodiert eine Beta-Globin-Untereinheit, die sich mit Alpha-Globin zu Hämoglobin zusammensetzt – dem Sauerstoffträger der Erythrozyten, der für die systemische Sauerstoffversorgung und den Transport von Kohlendioxid essenziell ist. Seine Expression ist während der Erythropoese durch erythroide Transkriptionsprogramme und die Regulation des Globin-Lokus eng koordiniert und unterstützt die Reifung roter Blutkörperchen sowie die Stabilität des Hämoglobin-Tetramers. Variationen in Dosierung oder Sequenz von Beta-Globin können die Hämoglobinfunktion und die Physiologie der Erythrozyten stören, wodurch Hbb-b2 ein nützliches Modellgen für die Untersuchung von Hämoglobinopathien und Anämie-assoziierten Mechanismen darstellt. Als Teil des Globin-Netzwerks liefert Hbb-b2 einen gut handhabbaren Readout für Signalwege, die die erythroide Differenzierung, den Umgang mit oxidativem Stress und hypoxie-responsive Biologie steuern.

Das Hbb-b2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Hbb-b2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Hbb-b2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Hbb-b2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Hbb-b2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Hbb-b2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Hbb-b2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Hbb-b2-Exone abzielen, die für die Hbb-b2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Hbb-b2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Hbb-b2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Hbb-b2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Hbb-b2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Hbb-b2 HDR-Plasmid (m) und Hbb-b2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Hbb-b2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Hbb-b2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.