HB9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402097-ACT

MNX1 codifica il fattore di trascrizione homeobox HB9, un regolatore nucleare che controlla programmi di espressione genica dello sviluppo. HB9 è noto soprattutto per guidare la specificazione e la differenziazione dei motoneuroni nel midollo spinale ventrale e per contribuire alle decisioni di linea pancreatica, dove influenza reti trascrizionali che governano il destino cellulare e la maturazione. Attraverso il legame al DNA in modo sequenza-specifico, HB9 si integra con processi più ampi di segnalazione dello sviluppo e di regolazione della cromatina, plasmando i pattern di espressione genica neuronale ed endocrina. Un’espressione deregolata di MNX1/HB9 è associata a disturbi congeniti dei motoneuroni ed è stata riportata anche in contesti di tumori ematologici e solidi, rendendolo un nodo utile per studiare la differenziazione aberrante e il controllo trascrizionale.

HB9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MNX1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

HB9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MNX1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MNX1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di HB9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MNX1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da HB9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via HB9 nelle cellule tumorali con espressione di MNX1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.