HADHA CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402803-ACT

HADHAは、長鎖脂肪酸のβ酸化に必須な多酵素複合体であるミトコンドリア三機能タンパク質（mitochondrial trifunctional protein）のαサブユニットをコードしています。HADHAはエノイルCoAヒドラターゼ活性および3-ヒドロキシアシルCoAデヒドロゲナーゼ活性を担い、ミトコンドリアでのエネルギー産生と脂質分解を支えることで、脂肪酸フラックスをレドックスバランスや代謝恒常性と結び付けます。HADHA機能の破綻は、ミトコンドリア脂肪酸酸化の異常や脂質関連の細胞ストレスと関連しており、代謝リモデリングやミトコンドリア機能障害の研究において重要な対象となります。脂肪酸酸化は酸化ストレス応答やオルガネラ品質管理とも交差するため、HADHAはミトコンドリアの健全性や脂質駆動性シグナル伝達を制御する経路の解析でしばしば検討されます。

HADHA CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性HADHAの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HADHA CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における HADHA 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はHADHA転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HADHAの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のHADHA遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHADHA依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびHADHA発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHADHA経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。