G_{β 1} Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401901-ACT

GNB1 codifica a subunidade humana Gβ1, um componente central das proteínas G heterotriméricas que acopla GPCRs ativados a efetores a jusante. Por meio da formação de complexos Gβγ e Gα, a Gβ1 ajuda a regular a sinalização por segundos mensageiros, como as vias de cAMP/PKA e as vias de Ca²⁺/PKC dependentes de PLCβ, modulando a dessensibilização de receptores, a modulação de canais iônicos e o envolvimento da cascata de MAPK. A sinalização dependente de GNB1 influencia diversos processos celulares, incluindo neurotransmissão, migração celular e controle metabólico. Alterações na atividade de GNB1 e o desequilíbrio na sinalização de proteínas G têm sido associados a fenótipos neurológicos e a uma desregulação mais ampla de vias controladas por GPCR, relevantes para estudos de mecanismos de doença.

Gβ 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GNB1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Gβ 1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GNB1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GNB1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Gβ 1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GNB1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Gβ 1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Gβ 1 em células tumorais com expressão de GNB1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.