Plasmide Double Nickase (h) G_{α t1}: sc-401559-NIC

GNAT1 code pour la sous-unité α de la transducine spécifique des bâtonnets, Gαt1, une protéine G hétérotrimérique qui couple la rhodopsine activée à la phosphodiestérase du cGMP (PDE6) lors de la phototransduction. Sous l’effet de la lumière, Gαt1 échange le GDP contre du GTP et propage un signal qui abaisse le taux de cGMP, module l’activité des canaux activés par les nucléotides cycliques et façonne le potentiel de membrane ainsi que la sortie synaptique des photorécepteurs. Cette cascade dépendante des GPCR est étroitement régulée par l’hydrolyse du GTP et la réassociation avec les sous-unités βγ, intégrant l’amplification du signal et la cinétique de récupération dans les bâtonnets rétiniens. Une dérégulation de la signalisation dépendante de GNAT1 a été associée à des dysfonctionnements rétiniens héréditaires, ce qui étaye son utilisation comme cible pour des études mécanistiques de la signalisation visuelle et de la physiologie des photorécepteurs.

Gα t1 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNAT1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNAT1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNAT1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNAT1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.