Plasmide Double Nickase (h) G_{α 15}: sc-403266-NIC

GNA15 code la sous-unité alpha Gα15 des protéines G hétérotrimériques, membre de la famille Gq, qui couple les GPCR activés à la phospholipase C-β, stimulant la production d’IP3/DAG, la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et une signalisation dépendante de la PKC. Cet axe influence en aval la voie MAPK/ERK ainsi que d’autres programmes transcriptionnels régulés par le Ca2+ qui façonnent l’activation des cellules immunitaires, la sécrétion et les réponses chimiotactiques. Gα15 est enrichie dans les lignées hématopoïétiques et est fréquemment utilisée comme substitut de couplage pour relier divers GPCR à des lectures calciques, facilitant la déconvolution des voies. Une signalisation GPCR–protéine G dérégulée impliquant GNA15 a été mise en cause dans divers contextes de signalisation inflammatoire et dans des études mécanistiques portant sur des programmes aberrants de prolifération et de différenciation.

Gα 15 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNA15 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNA15. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNA15. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNA15.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.