Plasmide Double Nickase (h) Gα 14: sc-404556-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Gα 14 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Gα 14 Double Nickase (h) et le plasmide Gα 14 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GNA14. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Gα 14 | sc-404556-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Gα 14 | sc-404556-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNA14 code pour la sous-unité alpha Gα14 des protéines G hétérotrimériques, membre de la famille Gq/11, qui couple les GPCR activés à la phospholipase C-β (PLCβ). Via la production d’IP3 et de diacylglycérol dépendante de PLCβ, Gα14 favorise la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et la signalisation de la protéine kinase C (PKC), reliant les signaux d’entrée des récepteurs à l’activation de MAPK/ERK et à des programmes transcriptionnels qui façonnent la prolifération, la différenciation et les réponses sécrétoires. L’activité de GNA14 est particulièrement pertinente dans les contextes où la signalisation des GPCR régit le tonus vasculaire, la fonction endocrine et l’activation des cellules immunitaires. Une dérégulation de la signalisation de type Gq, y compris des altérations impliquant GNA14, a été impliquée dans des signaux de croissance aberrants et dans la biologie tumorale, ce qui en fait un nœud utile pour explorer les voies dépendantes des GPCR.
Gα 14 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNA14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNA14. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNA14. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNA14.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.